Ua le atoatoa le Javascript i lau su'esu'ega.A fa'aletonu le javascript, o nisi o galuega a lenei 'upega tafaʻilagi o le a le aoga.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Matagaluega o Saienisi, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Sepania * O nei tusitala e iai ni malamalamaaga i lenei galuega Equal tuaa sao: Hyaluronic acid (HA) o se polysaccharide fa'alenatura e fa'aaogaina i le gaosiga o mea fa'atumu mo mea fa'alelei.Talu ai e iai lona afa-ola o ni nai aso i totonu o le tino o le tagata, o mea faʻapipiʻi faʻamaʻi e faʻavae HA e faʻaaogaina faʻamaʻi e faʻalautele ai lo latou ola i totonu o le tino.Ole suiga sili ona taatele ile faʻapipiʻiina o HA faʻatau pisinisi ole faʻaaogaina ole 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) e fai ma sui faʻafesoʻotaʻi e faʻafesoʻotaʻi le filifili HA.O le BDDE o lo'o totoe po'o le le tali atu ua manatu e le o'ona ile <2 vaega ile miliona (ppm);o le mea lea, o le BDDE totoe i le faʻamaʻi faʻamaʻi mulimuli e tatau ona faʻatusatusa ina ia mautinoa le saogalemu o le maʻi.Mea ma metotia: O lenei suʻesuʻega o loʻo faʻamatalaina ai le suʻesuʻeina ma le faʻavasegaina o se mea e maua mai i le fesoʻotaʻiga fesoʻotaʻiga i le va o le BDDE ma le HA i lalo o tulaga alkaline e ala i le tuʻufaʻatasia o le chromatography vai ma le tele o spectrometry (LC-MS).Iʻuga: Ina ua maeʻa suʻesuʻega eseese, na maua ai o tulaga alkaline ma le maualuga o le vevela na faʻaaogaina e faʻamaʻi ai le HA-BDDE hydrogel na faʻalauiloaina ai le faʻavaeina o lenei mea fou, o le "propylene glycol-like" compound.LC-MS su'esu'ega na fa'amaonia ai o le oloa fa'atasi e tutusa le tele o le monoisotopic e pei o le BDDE, e ese le taimi fa'atumauina (tR), ma le fa'aogaina o le UV (λ=200 nm) tulaga ese.E le pei o le BDDE, na matauina i le LC-MS suʻesuʻega i lalo o tulaga tutusa fua, o lenei oloa e maua ai le maualuga maualuga o le suʻesuʻeina ile 200 nm.Fa'ai'uga: O nei fa'ai'uga ua fa'ailoa mai ai e leai se epoxide i totonu o le fausaga o lenei fa'apotopotoga fou.O loʻo tatala le talanoaga e iloilo ai le lamatiaga o lenei oloa fou na maua i le gaosiga o le HA-BDDE hydrogel (HA dermal filler) mo faamoemoega faapisinisi.Keywords: hyaluronic acid, HA dermal filler, cross-linked hyaluronic acid, BDDE, suʻesuʻega LC-MS, BDDE faʻatau oloa.
Fillers e fa'avae i luga o le hyaluronic acid (HA) o mea sili ona taatele ma ta'uta'ua dermal fillers fa'aoga mo mea teuteu.1 O lenei dermal filler o se hydrogel, e masani ona aofia ai le> 95% vai ma le 0.5-3% HA, lea e tuʻuina atu ai ia i latou se fausaga pei o gel.2 HA o se polysaccharide ma o le vaega autu o le matrix extracellular o vertebrates.O se tasi o mea aoga.E aofia ai le (1,4) -glucuronic acid-β (1,3) -N-acetylglucosamine (GlcNAc) toe faʻaaogaina iunite disaccharide e fesoʻotaʻi i fusi glycosidic.O lenei mamanu disaccharide e tutusa i meaola uma.Pe a fa'atusatusa i nisi mea fa'atumu e fa'atatau i porotini (e pei o le collagen), o lenei mea totino e fa'atupuina ai le HA ose mole mole fa'aolaola.O mea fa'atumu e mafai ona fa'aalia ai le fa'asologa fa'asologa o amino acid e mafai ona iloa e le tagata ma'i.
Pe a faʻaaogaina e fai ma faʻamaʻi, o le tapulaʻa autu o le HA o lona vave faʻaleleia i totonu o masini ona o le i ai o se aiga faapitoa o enzymes e taʻua o hyaluronidases.E oʻo mai i le taimi nei, o le tele o suiga o vailaʻau i le fausaga HA ua faʻamatalaina e faʻateleina ai le afa-ola o HA i totonu o masini.3 O le tele o nei suiga e taumafai e fa'aitiitia le avanoa o le hyaluronidase i polysaccharide polymers e ala i le feso'ota'iina o filifili HA.O le mea lea, ona o le faʻavaeina o alalaupapa ma fesoʻotaʻiga intermolecular covalent i le va o le fausaga HA ma le sui faʻafesoʻotaʻi, o le HA hydrogel e fesoʻotaʻi i luga o le koluse e maua ai le tele o mea e faʻaleagaina ai le enzyme nai lo le HA masani.4-6
E oʻo mai i le taimi nei, o vailaʻau faʻafesoʻotaʻi vailaʻau o loʻo faʻaaogaina e gaosia ai HA faʻafesoʻotaʻi e aofia ai le methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl eter (BDDE) Ma poly(ethylene glycol) diglycidyl eter.10 ,11 BDDE o loʻo faʻaaogaina nei le sui faʻafesoʻotaʻi masani.E ui lava o nei ituaiga hydrogels ua faʻamaonia e saogalemu mo le tele o tausaga, o mea faʻafesoʻotaʻi o loʻo faʻaaogaina o mea faʻafoʻi faʻafoʻi atonu e cytotoxic ma, i nisi tulaga, mutagenic.12 O le mea lea, e tatau ona maualuga a latou mea o totoe i le hydrogel mulimuli.O le BDDE e manatu e saogalemu pe a la'ititi ifo i le 2 vaega i le miliona (ppm) le fa'asao totoe.4
E tele auala e iloa ai le maualalo o le toega o le BDDE, faʻasologa o fesoʻotaʻiga ma le tulaga suitulaga i HA hydrogels, e pei o le gas chromatography, chromatography le faʻaogaina o le tele faʻatasi ma le tele o spectrometry (MS), faʻamaneta faʻamaneta resonance (NMR) metotia fua faʻafefe, ma Fa'asologa o le diode fa'atasi ma le chromatography vai maualuga (HPLC).13-17 O lenei su'esu'ega o lo'o fa'amatalaina ai le su'esu'eina ma le fa'avasegaina o se mea fa'atau i le fa'au'u fa'a'oso'o fa'alava o le HA hydrogel na gaosia e ala i le tali atu o le BDDE ma le HA i lalo o tulaga alkaline.HPLC ma le chromatography vai-mass spectrometry (LC-MS su'esu'ega).Talu ai e le o iloa le oona o lenei mea faʻapitoa a le BDDE, matou te fautua atu e tatau ona fuafua lona faʻasologa o totoe i se faiga tutusa ma le auala e masani ona faia i luga o le BDDE i le oloa mulimuli.
O le masima sodium na maua o HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Iapani) ei ai le mamafa mole mole ~ 1,368,000 Da (Metotia Laurent) 18 ma se viscosity intrinsic o 2.20 m3 / kg.Mo le faʻaogaina o fesoʻotaʻiga, BDDE (≥95%) na faʻatau mai Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, ISA).Phosphate buffered saline ma le pH 7.4 na faʻatau mai le Sigma-Aldrich Company.O solvents uma, acetonitrile ma le vai na fa'aaogaina ile su'esu'ega LC-MS na fa'atau mai ile tulaga lelei ole HPLC.Formic acid (98%) o lo'o fa'atauina e pei o le reagent grade.
O faʻataʻitaʻiga uma na faia i luga o le UPLC Acquity system (Waters, Milford, MA, USA) ma faʻafesoʻotaʻi i se API 3000 triple quadrupole mass spectrometer faʻapipiʻiina i se puna eletise eletise (AB SCIEX, Framingham, MA, ISA).
O le faʻapipiʻiina o fesoʻotaʻiga o HA hydrogels na amataina i le faʻaopopoina o le 198 mg o le BDDE i le 10% (w / w) sodium hyaluronate (NaHA) solution i luma o le 1% alkali (sodium hydroxide, NaOH).O le fa'ai'uga mulimuli o le BDDE i le fa'afefiloi o tali e 9.9 mg/mL (0.049 mM).Ona faʻafefiloi lelei lea o le faʻafefiloi o tali ma faʻafefiloi ma faʻatagaina e faʻaauau i le 45 ° C mo le 4 itula.19 O le pH o le tali e tumau i le ~12.
Mulimuli ane, na fufuluina le faʻafefiloi o tali i le vai, ma faʻamama le HA-BDDE hydrogel mulimuli ma faʻafefeteina i le PBS buffer e maua ai le HA faʻaogaina o le 10 i le 25 mg / mL, ma le pH mulimuli o le 7.4.Ina ia mafai ona fa'amama le fa'aogaina o su'esu'ega HA hydrogels, o nei vaila'au uma e fa'amama (120°C mo le 20 minute).Ole BDDE-HA hydrogel ua fa'amamaina o lo'o teuina ile 4°C se'ia o'o ile su'esu'ega.
Ina ia suʻesuʻeina le BDDE o loʻo i ai i le oloa faʻafesoʻotaʻi HA, o se 240 mg faʻataʻitaʻiga na fuaina ma faʻafeiloaʻi i totonu o le pu ogatotonu (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, ISA; voluma 0.5 mL) ma faʻapipiʻiina i le 10,000 rpm i le vevela o le potu. 10 minute.Ole aofa'i ole 20 µL ole sua toso i lalo na aoina ma au'ili'ili.
Ina ia mafai ona suʻesuʻeina le tulaga BDDE (Sigma-Aldrich Co) i lalo o tulaga alkaline (1%, 0.1% ma 0.01% NaOH), pe a faʻamalieina tulaga nei, o le faʻataʻitaʻiga vai o le 1:10, 1:100, poʻo le maualuga. 1:1,000,000 Afai e manaʻomia, faʻaaoga le MilliQ deionized vai mo suʻesuʻega.
Mo mea amata o loʻo faʻaaogaina i le faʻaogaina o fesoʻotaʻiga (HA 2%, H2O, 1% NaOH, ma le 0.049 mM BDDE), 1 mL o faʻataʻitaʻiga taʻitasi na saunia mai nei mea na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai tulaga faʻavasega tutusa.
Ina ia iloa le faʻapitoa o tumutumu o loʻo faʻaalia i le faʻafanua o le ion, 10 μL o le 100 ppb BDDE faʻataʻitaʻiga fofo (Sigma-Aldrich Co) na faʻaopoopoina i le 20 μL faʻataʻitaʻiga.I lenei tulaga, o le faʻatonuga mulimuli o le faʻataʻitaʻiga i faʻataʻitaʻiga taʻitasi o le 37 ppb.
Muamua, saunia se vaifofo BDDE faʻasoa faʻatasi ma se faʻatonuga o le 11,000 mg / L (11,000 ppm) e ala i le faʻaitiitia o le 10 μL o le BDDE masani (Sigma-Aldrich Co) ma le 990 μL MilliQ vai (density 1.1 g / mL).Fa'aoga le vaifofo lea e saunia ai se vaifofo BDDE 110 µg/L (110 ppb) e fai ma vaifofo masani.Ona, faʻaaoga le BDDE standard diluent (110 ppb) e saunia ai le faʻasologa masani e ala i le faʻafefeina o le diluent intermediate i le tele o taimi e ausia ai le manaʻoga o le 75, 50, 25, 10, ma le 1 ppb.E pei ona faʻaalia i le Ata 1, o loʻo maua ai o le BDDE standard curve mai le 1.1 i le 110 ppb e lelei le laina (R2> 0.99).O le fa'asologa masani na toe faia i fa'ata'ita'iga tuto'atasi e fa.
Ata 1 BDDE fa'avasegaina fa'asologa fa'asologa na maua e le LC-MS su'esu'ega, lea e va'aia ai se fa'amaopoopo lelei (R2> 0.99).
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele.
Ina ia mafai ona faʻamaonia ma faʻatusatusa tulaga o le BDDE o loʻo i ai i totonu o le HA fesoʻotaʻi ma le BDDE tulaga faʻavae i le fofo faavae, na faʻaaogaina ai le suʻesuʻega LC-MS.
O le vavaeesega chromatographic na ausia i luga o le LUNA 2.5 µm C18 (2) -HST koluma (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, ISA) ma tausia i le vevela o le potu (25 ° C) i le taimi o le auiliiliga.O le vaega feaveai e aofia ai le acetonitrile (solvent A) ma le vai (solvent B) o loʻo iai le 0.1% formic acid.O le vaega fe'avea'i e fa'amama e ala i le fa'asolo malie.O le fa'alili e fa'apea: 0 minute, 2% A;1 minute, 2% A;6 minute, 98% A;7 minute, 98% A;7.1 minute, 2% A;10 minute , 2% A. O le taimi taʻavale e 10 minute ma le tui ole voluma e 20 μL.O le taimi fa'atumauina o le BDDE e tusa ma le 3.48 minute (mai le 3.43 i le 4.14 minute e fa'atatau i su'ega).O le vaega feaveaʻi na pamuina i le tafe o le 0.25 mL / min mo suʻesuʻega LC-MS.
Mo le BDDE auiliiliga ma quantification e MS, o le faiga UPLC (Suavai) ua tuʻufaʻatasia ma se API 3000 triple quadrupole mass spectrometer (AB SCIEX) faʻapipiʻiina i se puna eletise eletise, ma o le auiliiliga e faia i le tulaga lelei o le ion (ESI +).
E tusa ai ma le suʻesuʻega o le ion fragment na faia i luga o le BDDE, o le vaega e sili ona maualuga na faʻamoemoeina e avea ma vaega e fetaui ma le 129.1 Da (Ata 6).O le mea lea, i le tele-ion monitoring mode (MIM) mo le faʻatusatusaina, o le tele o le liua (mass-to-charge ratio [m / z]) o le BDDE o le 203.3 / 129.1 Da.E fa'aogaina fo'i le fa'ata'ita'iga atoa (FS) fa'ata'ita'iga ma le fa'ata'ita'iga o mea fa'aitoni (PIS) mo su'esu'ega LC-MS.
Ina ia faʻamaonia le faʻapitoa o le metotia, sa suʻesuʻeina se faʻataʻitaʻiga avanoa (muamua vaega feaveaʻi).E leai se faʻailoga na maua i le faʻataʻitaʻiga avanoa ma se suiga tele o le 203.3 / 129.1 Da.E tusa ai ma le toe faʻaaogaina o le faʻataʻitaʻiga, 10 tui masani o le 55 ppb (i le ogatotonu o le faʻasologa o le faʻavasegaina) na suʻesuʻeina, ma maua ai se faʻasologa faʻasologa o totoe (RSD) <5% (faʻamatalaga e le o faʻaalia).
O mea o totoe o le BDDE na fa'atusatusaina i totonu ole BDDE fa'a'ese'esega e valu fa'ato'a fa'afeagai ma le fa'ato'aga tuto'atasi.E pei ona faʻamatalaina i le vaega o le "Material and Methods", o le faʻatusatusaina o loʻo iloiloina i le tau averesi o le faʻasologa o le faʻasologa o le BDDE standard dilution, lea e fetaui ma le maualuga tulaga ese na maua i le BDDE mass transition of 203.3 / 129.1 Da, faʻatasi ai ma se taofiga. taimi ole 3.43 i le 4.14 minute Le fa'atali.O le Ata 2 o lo'o fa'aalia ai se fa'ata'ita'iga chromatogram o le 10 ppb BDDE fa'asinomaga tulaga.O le Siata 1 o lo'o aoteleina ai mea o totoe o le BDDE o lo'o i totonu ole vai vai e valu.Ole tau ole 1 ile 2.46 ppb.O le mea lea, o le totoe o le BDDE concentration i le faʻataʻitaʻiga e talia mo le faʻaaogaina e tagata (<2 ppm).
Ata 2 Ion chromatogram o le 10 ppb BDDE tulaga faʻasino (Sigma-Aldrich Co), MS (m / z) suiga na maua e LC-MS suʻesuʻega o le 203.30 / 129.10 Da (i le tulaga lelei MRM).
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali;MS, tele;m/z, fua faatatau o le tele-to-charge.
Fa'aaliga: Fa'ata'ita'iga 1-8 o BDDE fa'a'aso'o fa'alava fa'a'ava'ele'ele.O loʻo lipotia mai foʻi le aofaʻi o totoe o le BDDE i le hydrogel ma le pito i luga ole taimi ole BDDE.Mulimuli ane, o lo'o iai fo'i tumutumu fou e eseese taimi fa'atumauina o lo'o lipotia fo'i.
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;MRM, mata'ituina le tele o tali;tR, taimi taofi;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;RRT, taimi fa'atumauina.
O le mea e ofo ai, o le auʻiliʻiliga o le LC-MS ion chromatogram na faʻaalia ai e faʻavae i luga o faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga HA hydrogel uma e fesoʻotaʻi autoclaved na suʻesuʻeina, sa i ai se maualuga faaopoopo i le taimi puupuu o le taofia o le 2.73 i le 3.29 minute.Mo se faʻataʻitaʻiga, o le Ata 3 o loʻo faʻaalia ai le chromatogram ion o se faʻataʻitaʻiga HA fesoʻotaʻi, lea e aliali mai ai se tumutumu faʻaopoopo i se isi taimi taofi e tusa ma le 2.71 minute.O le va'aiga fa'amauina o le taimi (RRT) i le va o le tumutumu fou na matauina ma le tumutumu mai le BDDE na maua e 0.79 (Table 1).Talu ai matou te iloa o le tumutumu fou na matauina e itiiti le taofiofia i le koluma C18 o loʻo faʻaaogaina i le suʻesuʻega LC-MS, o le tumutumu fou e mafai ona fetaui ma se polar compound nai lo le BDDE.
Ata 3 Ion chromatogram o fa'ata'ita'iga hydrogel HA fa'afeso'ota'i fa'alava na maua e le LC-MS (MRM fa'aliliuga tele 203.3/129.0 Da).
Faapuupuuga: HA, hyaluronic acid;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali;RRT, taimi fa'atumauina;tR, taimi taofi.
Ina ia fa'amae'aina le fa'apea o tumutumu fou o lo'o va'aia e ono fa'aleaga muamua i mea mata na fa'aaogaina, o nei mea mata'ina sa su'esu'eina fo'i i le fa'aogaina o le LC-MS metotia su'esu'e.O mea amata na suʻesuʻeina e aofia ai le vai, 2% NaHA i le vai, 1% NaOH i le vai, ma le BDDE i le faʻaogaina tutusa o loʻo faʻaaogaina i le faʻaogaina o fesoʻotaʻiga.O le ion chromatogram o mea amata na faʻaaogaina e leʻi faʻaalia ai se faʻapipiʻi poʻo se tumutumu, ma o lona taimi faʻatumauina e fetaui ma le tumutumu fou na matauina.O lenei mea moni e lafoaʻia ai le manatu e le gata o mea amata e mafai ona aofia ai soʻo se mea faʻapipiʻi poʻo ni mea e ono faʻalavelave i le suʻesuʻega faʻataʻitaʻiga, ae leai se faʻailoga o le mafai ona faʻafefeina ma isi mea suʻesuʻe.O le faʻatatauga faʻatatau na maua ina ua maeʻa suʻesuʻega LC-MS o le BDDE ma tumutumu fou o loʻo faʻaalia i le Laulau 2 (faʻataʻitaʻiga 1-4) ma le chromatogram ion i le Ata 4.
Fa'aaliga: Fa'ata'ita'iga 1-4 e fetaui ma meafaitino na fa'aaogaina e gaosia ai le BDDE fa'a'asaga fa'akorusa HA hydrogels.O nei fa'ata'ita'iga e le'i fa'a'ato'atoaina.
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali.
Ata 4 e fetaui ma le LC-MS chromatogram o se faʻataʻitaʻiga o mea mataʻutia o loʻo faʻaaogaina i le faʻaogaina o fesoʻotaʻiga o HA ma BDDE.
Fa'aaliga: O nei mea uma e fuaina i le fa'atonuga tutusa ma le fua faatatau e fa'aaogaina e fa'atino ai le fa'agasologa o feso'ota'iga.O fuainumera mo meafaitino su'esu'e e le chromatogram e fetaui ma: (1) vai, (2) 2% HA vaifofo vai, (3) 1% NaOH vaifofo vai.LC-MS suʻesuʻega o loʻo faia mo le liua tele o le 203.30 / 129.10 Da (i le MRM lelei).
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, hyaluronic acid;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali.
O tulaga na mafua ai ona fausia ni tumutumu fou na suʻesuʻeina.Ina ia suʻesuʻe pe faʻafefea ona aʻafia le faʻaogaina o le faʻaogaina o le BDDE i le faʻaogaina o tulaga faʻaogaina e gaosia ai le HA hydrogel fesoʻotaʻi, e oʻo atu ai i le faʻavaeina o tumutumu fou (mea e mafai ona maua), na faia fua eseese.I nei faʻamoemoega, matou te suʻesuʻeina ma auʻiliʻili le BDDE crosslinker mulimuli, lea na togafitia i faʻasalalauga eseese o le NaOH (0%, 1%, 0.1%, ma le 0.01%) i totonu o se ala vai, sosoo ai ma le leai o se autoclaving.Ole faiga ole siama e fa'ata'ita'ia ai tulaga tutusa e tutusa ma le auala na fa'aaogaina e gaosia ai le HA hydrogel e feso'ota'i fa'alava.E pei ona faʻamatalaina i le vaega "Material and Methods", o le tele o suiga o le faʻataʻitaʻiga na suʻesuʻeina e le LC-MS i le 203.30 / 129.10 Da.O le BDDE ma le faʻaogaina o le tumutumu fou e faʻatatauina, ma o faʻaiʻuga o loʻo faʻaalia i le Laulau 3. E leai ni tumutumu fou na maua i faʻataʻitaʻiga e leʻi faʻapipiʻiina, e tusa lava po o le a le i ai o le NaOH i le vaifofo (samples 1-4, Table). 3).Mo faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻi, o tumutumu fou e naʻo le i ai o le NaOH i le fofo, ma o le faʻavaeina o le tumutumu e foliga mai e faʻalagolago i le faʻaogaina o le NaOH i le vaifofo (samples 5-8, Table 3) (RRT = 0.79).O le ata 5 o lo'o fa'aalia ai se fa'ata'ita'iga o se chromatogram ion, o lo'o fa'aalia ai ni fa'ata'ita'iga e lua ua tu'u fa'atosina i le i ai po'o le leai o le NAOH.
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali.
Manatua: Le pito i luga chromatogram: O le faʻataʻitaʻiga na togafitia i le 0.1% NaOH vaifofo vai ma faʻauma (120°C mo le 20 minute).Chromatogram pito i lalo: O le faʻataʻitaʻiga e leʻi togafitia i le NaOH, ae faʻapipiʻi i lalo o tulaga tutusa.O le suiga tele o le 203.30 / 129.10 Da (i le tulaga lelei MRM) na suʻesuʻeina e le LC-MS.
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali.
I faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻi uma, faʻatasi ma le leai o le NaOH, o le faʻaogaina o le BDDE na faʻaititia tele (e oʻo atu i le 16.6 taimi) (faʻataʻitaʻiga 5-8, Laulau 2).O le faʻaitiitia o le faʻaogaina o le BDDE atonu e mafua ona o le maualuga o le vevela, e mafai e le vai ona galue o se faʻavae (nucleophile) e tatala ai le mama epoxide o le BDDE e fausia ai se 1,2-diol compound.O le tulaga o le monoisotopic o lenei tuufaatasiga e ese mai le BDDE ma o lea e le afaina ai.Na maua e le LC-MS se suiga tele o le 203.30 / 129.10 Da.
Ma le mea mulimuli, o nei suʻesuʻega e faʻaalia ai o le faʻatupuina o tumutumu fou e faʻalagolago i le i ai o le BDDE, NAOH, ma le autoclaving process, ae leai se mea e fai ma HA.
Ole tumutumu fou na maua ile taimi fa'atumauina e tusa ole 2.71 minute na fa'ailoa mai e le LC-MS.Mo lenei faʻamoemoe, BDDE (9.9 mg / mL) sa faʻaofuofu i se 1% NaOH vai vaifofo ma autoclaved.I le Laulau 4, o uiga o le tumutumu fou o loʻo faʻatusatusa i le BDDE reference peak (taimi faʻatumauina e tusa ma le 3.47 minute).Faʻavae i luga o le suʻesuʻeina o le fragmentation o le ion o pito e lua, e mafai ona faʻauʻuina o le pito i luga ma se taimi faʻatumauina o minute 2.72 o loʻo faʻaalia ai vaega tutusa e pei o le BDDE peak, ae faʻatasi ai ma le malosi eseese (Ata 6).Mo le maualuga e fetaui ma le taimi faʻatumauina (PIS) o 2.72 minute, o se pito sili atu ona malosi na matauina ina ua maeʻa le vaevaega i le mamafa o le 147 Da.I le faʻaogaina o le BDDE (9.9 mg / mL) na faʻaaogaina i lenei faʻamoemoe, o auala eseese o le absorbance (UV, λ = 200 nm) i le fusi o le ultraviolet na matauina foi ina ua maeʻa le vavaeeseina o le chromatographic (Ata 7).O le pito i luga ma se taimi faʻatumauina o minute 2.71 o loʻo faʻaalia pea i le 200 nm, ae le mafai ona matauina le maualuga o le BDDE i le chromatogram i lalo o tulaga tutusa.
Fuafuaga 4 Fa'ailoga fa'ai'uga o le tumutumu fou ma se taimi fa'atumauina e tusa ma le 2.71 minute ma le maualuga o le BDDE ma le taimi fa'atumauina o le 3.47 minute.
Manatua: Ina ia maua nei faʻaiʻuga, LC-MS ma HPLC suʻesuʻega (MRM ma PIS) sa faia i luga o tumutumu e lua.Mo suʻesuʻega a le HPLC, e faʻaaogaina le suʻesuʻega o le UV ma le galu o le 200 nm.
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, chromatography vai maualuga;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali;m/z, fua faatatau o le tele-to-charge;PIS, su'ega Ion oloa;moli ultraviolet, moli ultraviolet.
Fa'aaliga: O vaega tetele e maua e le LC-MS su'esu'ega (PIS).Kromatogram pito i luga: alaleo tele o vaega fa'ata'ita'iga masani a le BDDE.Chromatogram pito i lalo: Ole tele ole alaleo ole tumutumu fou ua maua (RRT e fesoʻotaʻi ma le BDDE peak ole 0.79).BDDE sa fa'agasolo ile 1% NaOH fofo ma autoclaved.
Faapuupuuga: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, chromatography vai ma spectrometry tele;MRM, mata'ituina le tele o tali;PIS, su'esu'ega ion o oloa;RRT, taimi fa'atumauina.
Ata 7 Ion chromatogram o le 203.30 Da precursor ion, ma (A) o le tumutumu fou ma se taimi taofia o 2.71 minute ma (B) le iloa o le UV o le BDDE faasinomaga tulaga maualuga i 3.46 minute i 200 nm.
I fa'amauga uma o HA hydrogels na fa'aogaina, na matauina o le fa'ato'aga o le BDDE i le mae'a ai o le LC-MS quantification o le <2 ppm, ae o se tumutumu fou e le iloa na fa'aalia i le auiliiliga.O lenei tumutumu fou e le fetaui ma le oloa masani a le BDDE.O le oloa masani a le BDDE ua faia foi le suiga lelei tutusa (MRM liua 203.30 / 129.10 Da) auiliiliga i le tulaga lelei MRM.E masani lava, o isi metotia au'ili'ili e pei o le chromatography e fa'aaogaina e fai ma su'ega tapula'a e su'e ai le BDDE ile hydrogels, ae o le tapulaa maualuga e iloa ai (LOD) e la'ititi la'ititi nai lo le 2 ppm.I le isi itu, e oʻo mai i le taimi nei, o le NMR ma le MS na faʻaaogaina e faʻaalia ai le tikeri o le fesoʻotaʻiga ma / poʻo le suiga o le HA i vaega o le suka o mea faʻapipiʻi HA.O le fa'amoemoega o nei metotia e le'i fa'atatauina o totoe o le BDDE su'esu'ega i ni fa'atonuga maualalo e pei ona matou fa'amatalaina i lenei tusiga (LOD o la matou metotia LC-MS = 10 ppb).
Taimi meli: Sep-01-2021